תיאור מלא של שיטת תגובת שרשרת הפולימראז

תגובת שרשרת פולימראז (PCR) היא יצירת עותקים מרובים של קטע קצר של ה- DNA האנושי. כמות קטנה של חומר פיזיולוגי נחוצה למחקר ולהשגת תוצאות: כיח, דם, נוזל מי השפיר, רוק, שתן וכו '.

מהי תגובת שרשרת פולימראז?

שיטת ה- PCR פותחה על ידי המדען האמריקני מליסון, שקיבל בשנת 1998 את פרס נובל על התפתחותו. בשימוש פעיל:

• עם אבחון מוקדם של זיהומים, פתולוגיות אונקולוגיות;
• בבדיקה משפטית לחקר כמות דנ"א קטנה ביותר;
• ברפואה וטרינרית, ביולוגיה, גנטיקה מולקולרית;
• עבור זיהוי אישי על ידי DNA;
• לאשר את האבהות;
• באקולוגיה, למשל, בעת מעקב איכות המוצר, באנתרופולוגיה.

מי הוא prescribed PCR?

תגובת שרשרת פולימראז באבחון של פתולוגיות זיהומיות היא אחת השיטות הכי אמין שנותן את הניתוח המדויק ביותר ואמין. לדוגמה, את האמינות של הניתוח על chlamydia הוא קרוב ל 100%. לרוב, מדד אבחון זה נרשם למטופלים אשר במהלך הבדיקה מתקשים לזהות מחולל מחלה מסוים.

בדיקות מעבדה PCR להשתמש:

1. כדי לחפש אורגניזמים פתוגניים שגורמים לזיהומים בדרכי השתן ובאיברי המין, קשה לזהות בעת החלת גידולים או שיטת אימונולוגיה.
2. עבור ניתוח מחדש של HIV בשלב הראשוני עם תוצאה חיובית, אך מפוקפקת של הניתוח הראשוני, למשל, בתינוקות מהורים נגועים.
3. להקמת פתולוגיה אונקולוגית בשלב מוקדם ולתיקון אינדיבידואלי של משטר הטיפול בחולים.
4. לגילוי מוקדם וטיפול אפשרי בפאתולוגיות תורשתיות. אז, הורים עתידיים רבים בודקים כדי לגלות אם הם נשאים של מחלות גנטיות. אצל ילדים, שיטה זו קובעת את ההסתברות לחשיפה למחלות בירושה.

כמו כן, טכניקה זו משמשת:

• לזיהוי פתולוגיה של העובר בהריון מוקדם;
• בחולים לפני ניתוח השתלת איברים - יש צורך לקבוע את תאימות הרקמות
• לזהות פתוגנים מסוכנים בדם של התורם;
• בתינוקות לאיתור זיהומים נסתרים;
• כדי להעריך את התוצאות של טיפול אנטי ויראלי או מיקרוביאלי.

למה לעבור הליך זה?

מאז PCR נחשבת שיטת אבחון יעיל מאוד נותן כמעט 100% תוצאות, הליך זה משמש:

1. כדי לאשר או לא לכלול את האבחון.
2. להערכה מהירה של יעילות הטיפול.
3. במקרים רבים, שיטה זו נחשבת רק דרך אפשרית לזהות פתולוגיה לפתח, אם בטכניקות אחרות, וירוולוגיות בקטריולוגיות הוכיחו להיות חסר תועלת.
4. וירוסים באמצעות הליך ה- PCR מזוהים מיד לאחר ההדבקה ולפני הופעת הסימפטומים העיקריים.
5. גילוי מוקדם של מיקרואורגניזמים יאפשר טיפול מיידי.

בנוסף, ניתוח PCR יאפשר לך לזהות במהירות מספר קטן של מיקרואורגניזמים חיים או מתים דגימות. לכן, טכניקה זו משמשת כדי לחפש אורגניזם פתוגני מסוים, למשל, bacillus שחפת.

בנוסף, ניתוח PCR משמש:

• כדי לקבוע את הרגישות של DNA לסוגים מסוימים של אנטיביוטיקה, אשר יאפשר מהר ככל האפשר כדי להתחיל את הטיפול;
• לשלוט על התפשטות מגיפות;
• לזהות ולעקוב אחר סוגים חדשים של חיידקים, פתוגנים.

הסוגים העיקריים של PCR

שיטה סטנדרטית

ניתוח PCR מתבצעת על בסיס הכפלה מרובים של קטע דנ"א ספציפי RNA באמצעות אנזימים פריימר. הודות לכך, החוקר מקבל את כמות החומר הנדרשת.

בזמן אמת PCR

בסוג זה של מחקר, תהליך של זיהוי שבר מסוים הוא התחיל לאחר שעבר דרך כל מחזור. סוג זה של מחקר מאפשר לקבל מידע על מספר וירוסים מיקרואורגניזמים בגוף, כלומר, לבצע ניתוח כמותי.

מצב שעתוק הפוך מ PCR

ניתוח זה משמש לחיפוש RNA יחיד תקועים עבור איתור נוסף של וירוסים אשר הבסיס הגנטי נקרא RNA. לדוגמה, זהו וירוס הפטיטיס C, חיסוני, וכן הלאה. במחקר זה נעשה שימוש באנזים מיוחד, שבזכותו נבנה הדנ"א החד-גדילי. לאחר מכן המערכת מחזירה את גדיל ה- DNA השני ומבצעת את הנוהל המסורתי.

אינדיקציות עבור

ההליך PCR משמש במרפאות של מחלות זיהומיות, מיילדות, אורולוגיה, גינקולוגיה ונפרולוגיה, ילדים, וכן הלאה. האינדיקציות הנפוצות ביותר לניתוח הקצאה הן כדלקמן:

• כדי לקבוע את הסיכון לפתח הפרעות גנטיות אצל ילד בנוכחות פתולוגיות תורשתיות;
• כדי לאבחן את שני ההורים בעת תכנון הריון או כאשר האם במצב קשה בעת נשיאת ילד;
• עם קשיי ההתעברות לזהות את הסיבות לאי פוריות;
• במקרה של חשד לזיהומים מיניים בשלב החריף או בסיכון למעבר לשלב הכרוני;
• כדי לזהות את הגורמים לתהליכים דלקתיים ממוצא לא ידוע;
• עם מין בלתי מזוהה לא מוגן;
• כדי לקבוע את הרגישות של מיקרואורגניזם פתוגני לתרופה מסוימת;
• חשד לזיהום סמוי כדי לזהות פתוגנים ללא סימפטומים ברורים;
• כדי לאשר התאוששות ממחלה, כלומר, אבחון רטרוספקטיבי.

כמו כן, PCR משמש כאשר יש צורך לזהות במדויק פתוגנים כגון: וירוסים הפטיטיס, חיסוני אנוש, cytomegalovirus, וירוס הרפס סימפלקס, וירוס אדמת, וירוס פפילומה.

שם, שיטה זו משמשת לקביעת זיהומים: מונונוקליוזה מדבקת, דלקת קרום המוח, דלקת קנדידה, הנגרמת על ידי פטריות קנדידה, זיהומים באברי המין ושחפת.

אם התוויות נגד ושיטה בטוחה?

מאחר ונוהל זה מתבצע ללא כל השפעה על הגוף, ורק חומר ביולוגי משמש, אשר נלקח למחקר, אין התוויות נגד בשל היעדר סכנה פוטנציאלית לגוף. אבל לדוגמה, הדגימה ביולוגי של תעלת צוואר הרחם של הרחם לא מתבצעת לאחר colposcopy. ריחות משלוח, גרוטאות מותר רק 4-7 ימים לאחר תום הווסת ואת הפסקת מוחלט של פריקה.

תכונות של הכנה עבור ההליך

כמו מדגם לניתוח PCR, שבו DNA של הפתוגן הזר מזוהה, או נוזל ביולוגי או רקמות משמש. צריכת החומר הבדיקה מתבצעת בצורה של דגימת דם מווריד, שריטות מחלל האף, הגרון, צוואר הרחם, השופכה. לפני הליך האבחון, הרופא חייב להסביר למטופל איזה חומר יש לנקוט:

• בניתוח של זיהומים הרפס, mononucleosis לקחת ניתוח של שתן, כמו גם כתם מן הלוע;
• כאשר בודקים הפטיטיס או טוקסופלזמוזיס, הדם נלקח מווריד;
• על מנת לאבחן סוגים שונים של נזק CNS, נוזל השדרה הוא נלקח;
• ב פולמונולוגיה, דגימות לניתוח PCR הם נוזל pleural ו כיח;
• אם הוא מבצע מחקר של זיהומים תוך רחמיים במהלך ההריון, נוזל מי השפיר, תאים שליה משמשים לניתוח.

האמינות והדיוק של התוצאה תלויה בעקרות ובתנאים של נטילת חומר ביולוגי. מאחר ומחקרי ה- PCR רגישים מאוד, כל זיהום של החומר שנלקח עלול לעוות את התוצאות. הכנה מוכשרת לאספקת החומר הביולוגי אינה מהווה קשיים כלשהם עבור המטופל.

אבל יש כמה המלצות:

• כאשר מנתחים זיהומים המועברים במגע מיני, יש צורך לא לכלול קשרים אינטימיים שלושה ימים לפני מסירת החומר;
• 72 שעות צריך להפסיק את השימוש של כל ההכנות הנרתיק;
• מן הערב של היום הקודם, אין היגיינה של אזורים למד יכול להתבצע
• 3-4 שעות לפני נטילת דגימה מן השופכה, השתנה צריך להיות מחוץ;
• חודש לפני ביצוע בדיקות אתה צריך להפסיק לקחת אנטיביוטיקה;
• דם ניתנת בבוקר על קיבה ריקה לפני אכילה ושתייה;
• השתן בבוקר נאסף במיכל סטרילי לאחר הולך לשירותים.

איך זה PCR?

בעת ביצוע מחקר בכור מיוחד, חוזר מחזור מסוים:

1. הצעד הראשון. Denaturation. רוקן, דם, בדיקות גינקולוגיות וחומרים אחרים ממוקמים במוליך, שם החומר מחומם וה DNA מחולק לשתי שרשרות.
2. השלב השני. קירור קל של החומר נלקח, והוסיף לו רכיבים מיוחדים המכירים את החלקים הדרושים של מולקולת ה- DTC ו להיקשר אליו.
3. 3 צעד. התארכות במהלך התהליך, השלב של DTC של האורגניזם הפתוגני הושלמה, עותק של זה נוצר. מחזור זה חוזר על עצמו, אשר מכפיל את העותק של קטע ה- DNA הספציפי.

בתוך כמה שעות, עותקים רבים של קטע זה נוצרים, נוכחותם בדגימות מתגלה. אז התוצאות מושוות עם בסיסי נתונים של סוגים שונים של פתוגנים. זה מאפשר לך לקבוע את סוג ההדבקה.

תכונות של ניתוח פענוח?

התוצאה הסופית של המחקר תינתן לחולה מספר ימים לאחר הניתוח הביולוגי.

ניתוח איכותי

תוצאה שלילית במקרה זה פירושה כי לא זיהה סוכן זיהומיות בנוזל שהוגש לבדיקה. תוצאה חיובית מצביעה על איתור של וירוסים פתוגניים או חיידקים במדגם ביולוגי. אם התוצאה היתה חיובית, אבל לאדם אין סימנים של הפעלת זיהום, מצב כזה של הגוף נקרא המוביל בריא אסימפטומטי.

לרוב, זה נצפתה כאשר לוקחים את ביולוגי בפתולוגיות ויראלי. במקרה זה, הטיפול אינו נדרש, אבל זה דורש פיקוח רפואי מתמיד. מאחר ובתנאים כאלה קיימת הסתברות:

• התפשטות הנגיף מן המוביל לאנשים בריאים;
• הפעלת התהליך ומעבר הפתולוגיה לצורה הכרונית.

ניתוח כמותי

התוצאה הכמותית נקבעת על ידי מומחה במיוחד עבור סוג מסוים של זיהום. בהתבסס על התוצאות המתקבלות, ניתן להעריך את מידת ההתפתחות, שלב הפתולוגיה, המאפשר מתן טיפול במהירות האפשרית.

צפה בסרטון: תגובת של שרשרת של פולימראז PCR (מאי 2024).